《最后的晚餐》叛徒是犹大，基督的12使徒，路加福音记载，在最后的晚餐中主耶稣宣布了圣餐的意义以出立约的宣告之后，紧接下去，说了一句令当时的众门徒大吃一惊的一句话：“看哪，那卖我之人的手，与我一同在桌子上。”。加略人犹大蒙主拣选为门徒，三年与主同在、同行、同桌、同吃；最后竟然以三十块钱（将耶稣卖给仇敌！
据《新约圣经·马可福音》载：耶稣最后一次到撒冷去过逾越节，犹太教祭司长阴谋在夜间逮捕他。正在这时，耶稣的门徒犹大向犹太教祭司长告密说：“我把他交给你们，你们愿意给我多少钱？”犹太教祭司长就给了犹大30块钱。于是，犹大跟祭司长约好：他亲吻的那个人就是耶稣。逾越节那天，耶稣跟12个门徒坐在一起，共进最后一次晚餐，他忧郁地对12个门徒说：“我实话告诉你们，你们中有一个人要出卖我了！”12个门徒闻言后，或震惊、或愤怒、或激动、或紧张。《最后的晚餐》表现的就是这一时刻的紧张场面。
犹大一生的历史展示一个本来可蒙上帝褒扬的人生的悲惨结局。假如犹大在未踏上耶路撒冷之前就死去的话，后世的人就会认为他配列在十二使徒之中，为后人所怀念。若不是他在生命的终了时露出他的本性，那就不会留下骂名了。
在逾越节之前不久，犹大与祭司们谋划，要将耶稣交在他们手中，打算在救主常去默想和祈祷的地方捉拿他。自从在西门家里赴席之后，犹大本有机会反省他的计划和所要作的事，但他没有改变自己的打算。他竟为了三十块银钱一个奴隶的身价出卖了荣耀的主，让他受侮辱，将他害死。犹大并非一开始就坏到这个地步。只因他放纵恶欲，直到这恶欲支配了他整个人生的动机。他因作了罪恶的奴隶，就把自己献给撒旦，任他驱使去干一切罪恶的事。
达·芬奇不仅在绘画技艺上力求创新，在画面的布局上也别具新意。达·芬奇却让十二门徒分坐于耶稣两边，耶稣孤寂地坐在中间，他的脸被身后明亮的窗户映照，显得庄严肃穆。背景强烈的对比让人们把所有的注意力全部集中于耶稣身上。耶稣旁边那些躁动的弟子们，每个人的面部表情、眼神、动作各不相同。尤其是慌乱的犹大，手肘碰倒了盐瓶，身体后仰，满脸的惊恐与不安。
