高脚蛛没有毒，严格的说所有的蜘蛛都是有毒的，只是大多数蜘蛛的毒性都是微乎其微的。因为它就是靠毒汁来猎取猎物的，而且蜘蛛的毒大多是通过它的牙刺入猎物等的身体产生的。他们的毒液就是消化液，用来体外消化食物的就像口水所以所有蜘蛛都是有毒的。
只有两个科的蜘蛛是无毒的。现存最原始的蜘蛛，中纺亚目下的节板蛛科和新蛛类中有筛器的圆网蛛妩蛛科是没有毒腺的，前者还没进化出，后者毒腺退化消失。除这两科外所有蜘蛛都有一对毒腺，也就是说是有毒性的。并且蜘蛛的色彩越是鲜艳，其毒性就越强。
真正的有毒蜘蛛有多少，尚无确切统计，世界上毒性较强的，有球蛛科的地中海黑寡妇蛛，甲蛛科的褐平甲蛛，天疣蛛科的澳大利亚漏斗蛛、栉足蛛科的黑腹栉足蛛、捕鸟蛛科的澳大利亚捕鸟蛛。线蛛属，捕鸟蛛属，咬伤的伤口较大而深，狼蛛属，园蛛属等咬伤则较轻。Phoneutria蛛的毒素很强，雌性蛛的毒性要比雄性蛛的毒性强得多，雄性蛛不会给人以致死量的毒素。由于蜘蛛的毒性很强，在巴西，地中海东部，南斯拉夫等国，见蜘蛛都生畏。
在饲养、操作和采毒过程中，有时难免被毒蜘蛛咬伤。穴居型蜘蛛毒液毒性的大小，随种类、性别、个体大小和成熟程度以及季节的不同而有所差异。一般雌蛛比雄蛛的毒性要大些，而成熟蜘蛛又比幼蛛的毒性大些。从季节来看，刚出蛰的蜘蛛和孵化期间的雌蛛毒性最强。蜘蛛是以其头胸部前端的一对螯肢进行攻击的，毒液经由螯肢上螯牙的尖端小孔注入皮下，此时被咬处可看到两个针眼口。
